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Pesquisas indicam que o tecido nervoso periférico sensorial, não o tecido conjuntivo, está envolvido na ação da acupuntura

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Agora em fevereiro de 2019 uma pesquisa publicada na Frontiers in Neuroscience por Chang et.al, buscou relatar o caminho ou a resposta inicial da aplicação da agulha de acupuntura no corpo, a pesquisa foi intitulada “Tecido nervoso periférico sensorial, mas não tecido conjuntivo, está envolvido na ação da acupuntura”. A pesquisa da uma luz àqueles que buscam explicações cientificas para a ação das agulhas, mas sabemos que há muito mais que isso, e eles afirmam o mesmo, quando em suas conclusões dizem que somente a ação do sistema nervoso não explica os resultados obtidos no uso da acupuntura. Deixo o artigo para que vocês possam ter suas conclusões.


Peripheral Sensory Nerve Tissue but not Connective Tissue is Involved in the Action of Acupuncture

A acupuntura tem sido usada para tratar uma variedade de doenças e sintomas por mais de 2.500 anos. Embora vários estudos tenham mostrado que os nervos são responsáveis ​​por iniciar os efeitos da acupuntura, várias linhas de estudo enfatizaram o papel do tecido conjuntivo no início dos sinais de acupuntura. Para determinar se os nervos ou tecido conectivo mediam a ação da acupuntura, construímos um twister de agulha de acupuntura robótica que imitava a torção da agulha por um acupunturista, e examinamos o papel dos nervos e tecidos conjuntivos na geração de efeitos da acupuntura em ratos na atividade locomotora induzida por cocaína, hipertensão induzida por estresse e modelos de dor visceral induzida por óleo de mostarda. A torção robótica ou manual das agulhas de acupuntura efetivamente suprimiu a hiperatividade induzida pela cocaína, elevada pressão arterial sistêmica ou dor visceral induzida por óleo de mostarda em ratos. Esses efeitos de acupuntura foram completamente abolidos pela injeção de bupivacaína, um anestésico local, em acupontos. No entanto, a ruptura do tecido conjuntivo pela injeção de colagenase tipo I nos pontos de acupuntura não afetou esses efeitos da acupuntura. Nossos achados sugerem que o tecido nervoso, mas não o tecido conjuntivo, é responsável por gerar os efeitos da acupuntura.

INTRODUÇÃO

A acupuntura tem sido usada para tratar várias doenças em países asiáticos nos últimos 2.500 anos e tem sido amplamente praticada em muitos países. Em 1997, os Institutos Nacionais de Saúde (NIH) dos Estados Unidos relataram a segurança e a eficácia da acupuntura no tratamento de uma ampla gama de condições, incluindo abuso de drogas, reabilitação de derrame e dor de cabeça (Nih Consensus Conference, 1998). Em uma revisão bibliométrica das publicações sobre pesquisa em acupuntura na PubMed nos últimos 20 anos, a pesquisa em acupuntura aumentou acentuadamente nas últimas duas décadas, com o dobro da taxa de crescimento da pesquisa biomédica em geral. Embora a dor (aproximadamente 38% das publicações) seja consistentemente o tópico mais comum da pesquisa em acupuntura, as publicações de ensaios clínicos randomizados têm aumentado em números em uma taxa alta (Ma et al., 2016). Embora esses estudos tenham mostrado a eficácia da acupuntura, os mecanismos pelos quais os sinais de acupuntura são iniciados e transmitidos permanecem contraditórios e inconclusivos.

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Imagem ilustrativa, não se refere ao estudo

 

A acupuntura é uma intervenção terapêutica para melhorar a eficiência dos mecanismos homeostáticos do corpo, estimulando acupontos. Existem dois modelos líderes no início dos sinais de acupuntura: o modelo neurológico e o modelo de tecido conjuntivo. O modelo neurológico, que é de longe o mais amplamente aceito e estudado, postula mediação pelo sistema nervoso, com sinais de acupuntura sendo iniciados pela ativação de terminações nervosas sensoriais e fibras nervosas específicas e transmitidas ao cérebro através de vias nervosas, resultando em uma variedade de efeitos fisiológicos. Em apoio a esta visão, foi relatado que a acupuntura produz um efeito antinociceptivo pela liberação de adenosina em terminais nervosos periféricos em roedores (Goldman et al., 2010). A estimulação por acupuntura nos pontos de acupuntura do punho, PC5-6, aumentou a atividade das fibras A e C para evocar efeitos cardiovasculares (Zhou et al., 2005). Nossos estudos anteriores mostraram que a acupuntura no C7 atenua os comportamentos induzidos por drogas ou de busca de drogas para substâncias como cocaína, morfina e etanol (Yoon et al., 2004 , 2010 , 2012; Yang et al., 2010). Durante a estimulação com acupuntura, aferentes sensitivos periféricos, como os corpúsculos de Pacinian e Meissner, são ativados, e os sinais aferentes são transmitidos pelas fibras A do nervo ulnar (Kim et al., 2013) e pela via somatossensorial na coluna dorsal medular. (Chang et al., 2017). Embora a evidência cumulativa tenha apoiado o modelo neurológico, nas últimas duas décadas surgiu uma outra hipótese, conhecida como “modelo do tecido conjuntivo”, para abordar possíveis papéis do tecido conjuntivo no início dos sinais da acupuntura (Langevin e Yandow, 2002; Langevin, 2014). De acordo com este modelo, a torção ou rotação da agulha de acupuntura cria um enrolamento de tecido conjuntivo ao redor da agulha e deformação das fibras de colágeno, que inicia sinais mecânicos transmitidos através da rede de fáscia de corpo inteiro, as camadas de tecido conectivo ao redor dos músculos, órgãos e veias de sangue. Grupos de pesquisa propuseram que o tecido conjuntivo pode mediar os efeitos da acupuntura manual através de várias vias: transmissão de um sinal mecânico da agulha para nervos sensitivos aferentes próximos, sinalização purinérgica potencial dentro de fibroblastos do tecido conjuntivo com efeitos locais nos nervos sensoriais e efeitos diretos na patologia do tecido conjuntivo, possivelmente envolvendo reduções na inflamação e/ou fibrose (Langevin e Yandow, 2002; Langevin et al., 2007; Langevin, 2014; Wu et al., 2015). No entanto, resta saber se o tecido conjuntivo medeia os efeitos terapêuticos da acupuntura. Embora se acredite que esses modelos forneçam explicações plausíveis para o início dos sinais de acupuntura, atualmente não há evidências de que esses dois modelos funcionem de maneira separada ou sinérgica.

Para investigar se os efeitos da acupuntura são mediados pelo nervo ou pelo tecido conjuntivo, usamos nosso recém-construído agulha twister para testar os efeitos da torção da acupuntura nos modelos de locomoção induzida por cocaína, hipertensão induzida por imobilização e dor visceral induzida por óleo de mostarda, e explorar se os efeitos da acupuntura são alterados por bloqueio dos nervos ou ruptura do tecido conjuntivo.

MATERIAIS E MÉTODOS

[…]

Produtos Químicos

Cocaína (15 mg / ml salina, MacFarlan Smith Ltd., Reino Unido), óleo de mostarda (30 ~ 50 μl; alil isotiocianato, Sigma Aldrich, EUA) e bupivacaína (20 μl / loci, 5 mg / ml, Huons Pharm, Sul Coréia, um anestésico local de ação prolongada). Colagenase tipo I (20 μl / loci, solução salina a 5 mg / ml, Sigma Aldrich, EUA) ou em conjunto com azul de toluidina (20 μl / loci, 1 mg / ml, Sigma Aldrich) foi injetada. A bupivacaína ou colagenase tipo I foi injetada em pontos de acupuntura a uma profundidade de 3 mm, perpendicular à superfície da pele, usando uma seringa com uma agulha de calibre 32.

Medição da duração e ângulo de rotação durante a torção manual da agulha

Uma agulha (0,20 mm de diâmetro, comprimento da agulha de 30 mm e comprimento da alça de 20 mm; Dongbang Medical Co., Coréia) com fita vermelha no eixo foi inserida em uma placa de isopor para medir a duração da rotação (velocidade) e ângulo durante torção manual da agulha ( Figura 1A ). Acupunturistas ( n = 3) foram solicitados a torcer o cabo da agulha de acupuntura por pelo menos 20 segundos e gravar o vídeo. Este procedimento foi repetido duas vezes por pessoa. A duração e o ângulo de rotação foram analisados ​​usando um programa de media player (Gom Player, Gom and Company, Coréia).

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Figura 1 . Acupuntura de torção e construção de uma agulha de acupuntura robótica (RANT). (A) Medição de durações de rotação e ângulos durante a torção manual da agulha. Uma agulha com uma fita vermelha no eixo foi inserida em uma placa de isopor e gravada em vídeo. (B)Duração média das rotações da agulha. Foram analisados ​​os movimentos de 30 voltas de CW, 52 pausas e 28 voltas de ACW durante a torção da agulha por 3 acupunturistas. (C) Ângulo de rotação médio da agulha. Foram analisados ​​os movimentos de 30 voltas e 28 voltas de ACW durante a torção da agulha por 3 acupunturistas. (D)Um dispositivo RANT construído. O servomotor no instrumento de agulhamento foi montado em um braço flexível fixado com um porta-agulha e controlado pelo software de controle. CW, sentido horário; ACW, sentido anti-horário.

Um Twister de Agulha de Acupuntura Robótica (RANT) e Tratamento com Acupuntura

Um twister robótico foi construído para imitar uma técnica de torção de agulha que é comumente realizada por acupunturistas. Este dispositivo consistia de um instrumento de agulhagem portátil acoplado a um servo-motor (ez-SERVO, Fastech, Coréia), um computador pessoal conectado a um controlador servo-motor (ez-SERVO, Fastech, Coréia) e um programa de controle personalizado (LabVIEW , National Instruments, Austin, TX, EUA). O eixo de rotação do servo motor foi acoplado a um suporte de agulha ( Figura 1D ). Um anel de borracha foi fixado à agulha a uma distância de 2 ou 3 mm da ponta, como descrito anteriormente ( Kim et al., 2013 ), para controlar a profundidade da inserção da agulha de acupuntura.

No modelo de rato de atividade locomotora induzida por cocaína, agulhas de acupuntura (0,10 mm de diâmetro, comprimento da agulha de 10 mm e comprimento da alça de 10 mm; Dongbang Medical Co., Coréia do Sul) foram inseridas perpendicularmente ao acuponto C7 a uma profundidade de 3 mm, torcido por 20 s com o dispositivo RANT, mantido no lugar por até 60 s após a inserção da agulha e retirado. No modelo animal de hipertensão induzida por imobilização, as agulhas foram inseridas perpendicularmente ao acuponto PC6 a uma profundidade de 3 mm, torcidas por 10 min com o dispositivo RANT e retiradas. No modelo de rato para dor visceral induzida por óleo de mostarda, as agulhas de acupuntura foram inseridas com 2-3 mm de profundidade no B62-64 e torcidas manualmente por 30 s em intervalos de 10 min, que foi repetido 4 vezes por um total de 30 min.

Atividade Locomotora Induzida por Cocaína

A atividade locomotora foi medida através de um sistema de rastreamento de vídeo (EthoVision, Noldus Information Technology BV, Holanda). Resumidamente, em uma sala mal iluminada, cada animal foi colocado em uma caixa quadrada de campo aberto (40 × 40 × 45 cm) feita de acrílico preto. O software de rastreamento de vídeo (EthoVision 3.1) mediu a distância percorrida (cm). No dia do teste, os animais foram habituados por pelo menos 60 min. Após a atividade basal que foi registrada por 30 min, o animal recebeu uma injeção intraperitoneal de cocaína (15 mg / kg) e tratamento com acupuntura e foi monitorado por até 60 min após a injeção. Os dados são relatados como a distância total percorrida (cm) em 1 h ou a distância percorrida (cm) durante cada 10 min.

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Imagem ilustrativa, não se refere ao estudo

Hipertensão Induzida por Imobilização e Medição da Pressão Arterial

A hipertensão foi induzida pela contenção em animais de um saco plástico em forma de cone, como descrito anteriormente ( Kim et al., 2017 ). A pressão arterial sistólica foi medida de forma não invasiva com um monitor de pressão arterial do manguito de cauda (Modelo 47, IITC). Resumidamente, os ratos contidos foram colocados numa câmara mantida a 27 ° C, e um cuff de oclusão e um transdutor de pulso pneumático foram posicionados na base da cauda do rato. Um eletrofigmomanômetro programado (Narco Bio-Systems Inc., EUA) foi insuflado e desinsuflado automaticamente, e os sinais do manguito de cauda do transdutor foram automaticamente coletados a cada 10 min, usando um aparelho IITC (Model 47, IITC Inc., EUA). A média das duas leituras foi feita em cada medição da pressão arterial.

Dor Visceral Induzida por Óleo de Mostarda e Medição da Resposta Eletromiográfica à Distensão Colorretal

Um par de eletrodos de fio de prata (0,20 mm de diâmetro, Nilaco, Japão) foram inseridos no músculo oblíquo externo do abdome, enterrados por 10 mm de comprimento e separados por 10 mm para registro eletromiográfico (EMG). A distensão colorretal (DRC) foi aplicada usando um balão inflável (3 cm de comprimento, 1 cm de diâmetro) ligado a uma linha intravenosa através de um conector em T conectado a um bulbo com uma válvula e um esfigmomanômetro. Gravações eletromiográficas em resposta à estimulação da DRC por 5 s nas intensidades de 20, 40, 60 e 80 mmHg foram realizadas. O sinal EMG foi amplificado (× 10.000, 300-1.000 Hz; ISO-80, World Precision Instruments, EUA), digitalizado e analisado com uma interface de aquisição e análise de dados (Micro1401, CED, UK). Após a medição da linha de base, para indução de dor no cólon, um óleo de mostarda (30 ~ 50 μl; Sigma Aldrich) Q-tip encharcado foi inserido no cólon, aproximadamente 5 cm proximal ao ânus, mantido por 30 min e retirado. A acupuntura foi então aplicada e a EMG foi registrada até 30 minutos após o tratamento com acupuntura.

[…]

Análise de dados

Todos os dados são apresentados como a média ± EPM (erro padrão da média) e analisados ​​por análise repetitiva de variância de uma ou duas vias (ANOVA) seguida de teste post hoc usando o método de diferença menos significativa de Fisher (LSD) ou pareado ou teste t não pareado , quando apropriado. Significância estatística foi considerada em P <0,05.

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Imagem ilustrativa, não se refere ao estudo

RESULTADOS

[…]

Quando os parâmetros para o dispositivo foram definidos, o twister robótico replicou o movimento da manipulação da agulha de acupuntura humana.

Acupuntura Torcida Suprimiu Atividade Locomotora Induzida por Cocaína

Para testar se o efeito do efeito de acupuntura é dependente da duração da rotação da agulha (e velocidade), avaliamos os efeitos da rotação da agulha em várias durações na atividade locomotora realçada pela cocaína. […] Ratos de controle receberam a injeção de cocaína sem tratamento com acupuntura. Uma injeção aguda de cocaína aumentou rapidamente a atividade locomotora, que durou até aproximadamente 60 min após a injeção, com um pico aos 10 min (grupo cocaína nas Figuras 2A, B). A acupuntura aplicada com a condição Duração-D3 (velocidade de rotação mais rápida) diminuiu significativamente a locomoção induzida por cocaína em comparação com o grupo controle [one-way ANOVA, (3, 21) = 3,706; p <0,05 vs. Controle; Figuras 2C, D ]. No entanto, a torção da agulha em outras durações (Duração-D1 e D2) ou colocação da agulha sem torção não inibiu o aumento da atividade locomotora induzido pela cocaína, sugerindo que os efeitos inibitórios não eram dependentes da duração do estímulo. Para determinar se os efeitos inibitórios da acupuntura de torção são dependentes do ângulo de rotação da agulha, os ratos ( n= 29) foram divididos aleatoriamente nos seguintes grupos: controle e 180 ° -, 360 ° – e 720 ° – grupos de ângulo de rotação ( Tabela 2 ). Embora a estimulação por acupuntura tendesse a diminuir a resposta locomotora à cocaína de maneira angular, efeitos inibitórios significativos da acupuntura na atividade locomotora foram encontrados nos grupos de ângulos de rotação de 360 ​​° e 720 ° em comparação com o controle [one-way ANOVA, (3, 21) = 4,998; p <0,05 vs. Controle; Figuras 2E, F ]. Como uma condição de torção da Duração-D3 produziu efeitos de acupuntura consistentes e reprodutíveis, o parâmetro foi usado em experimentos subsequentes.

Peripheral Sensory Nerve Tissue but Not Connective Tissue Is Inv

Tabela 1 . Parâmetros para várias durações rotacionais por twister robótico.

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Figura 2 . Efeito da torção da acupuntura por RANT na atividade locomotora aumentada de cocaína. (A) Esquema para medição da atividade locomotora (superior) e traçados representativos em ratos normais ou tratados com cocaína (inferior). (B) Melhoria da atividade locomotora após injeção intraperitoneal de cocaína ( n = 7) em comparação com ratos normais ( n = 5). * p <0,05 vs. normal. (C, D) Efeito da acupuntura em várias durações de rotação na locomoção induzida pela cocaína. A torção da agulha na Duration-D3 diminuiu significativamente a locomoção induzida pela cocaína em comparação com o grupo controle [* p <0,05 vs. Normal; p<0,05 vs. Controle (somente cocaína sem acupuntura); Normal, n = 5; Controle, n = 7; Duração-D1, n = 8; Duração-D2, n = 7; Duração-D3, n = 6). (E, F) Efeito de vários ângulos de rotação da agulha por RANT na locomoção induzida por cocaína. A inibição da locomoção induzida por cocaína foi encontrada em grupos de ângulo de rotação de 360 ​​° ou 720 ° em comparação com o controle (somente cocaína). (* p <0,05 vs. Normal; p <0,05 vs. Controle; n = 6 por grupo).

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Tabela 2 . Parâmetros para vários ângulos de rotação produzidos pelo twister robótico.

Efeitos de acupuntura foram prevenidos pelo bloqueio do nervo, mas não pela ruptura do tecido conectivo

Para investigar se os efeitos da acupuntura são mediados via nervo ou tecido conjuntivo, injetamos bupivacaína (um anestésico local) ou colagenase tipo I (uma enzima proteolítica) em acupontos 30 min antes do tratamento com acupuntura. O experimento foi realizado pela primeira vez no modelo de rato de locomoção de cocaína. Enquanto a acupuntura no C7 atenuou o aumento da atividade locomotora induzido pela cocaína, tais efeitos foram inibidos pelo pré-tratamento da bupivacaína, mas não da colagenase, indicando a mediação do nervo aferente [one way ANOVA, (3, 21) = 4,998; * p <0,05 vs. normal; p <0,05 vs. Controle; p <0,05 vs. BUPIVA + Acup; Figuras 3A – C]. Para confirmar ainda mais isso, repetimos as experiências nos modelos de ratos de hipertensão induzida por imobilização (IMH) ou dor visceral induzida por óleo de mostarda. Para o modelo IMH, quando um rato foi colocado em uma bolsa de imobilização, a pressão arterial sistólica (PAS) aumentou gradualmente pelas próximas horas (Controle; Figuras 3D – F ), consistente com nosso estudo anterior (Kim et al., 2017). A torção da acupuntura na PC6 com o dispositivo robótico impediu o desenvolvimento de hipertensão em comparação com o controle (* p <0,05 vs. Controle; Figura 3F). Quando a bupivacaína ou colagenase foi injetada no PC6 30 min antes do tratamento com acupuntura, os efeitos da acupuntura foram prevenidos em ratos tratados com bupivacaína, mas não em ratos tratados com colagenase (Figuras 3E, F). Inesperadamente, foram observadas diferenças significativas nos momentos de 100-120 min entre os grupos controle e BUPIVA + Acup ( p <0,05 comparado ao grupo controle; Figura 3F ). Comparado ao nosso estudo anterior (Kim et al., 2017), 2 de 5 ratos controle desenvolveram hipertensão limítrofe (140–160 mmHg) e não atingiram uma PAS de 160–180 mmHg no final da imobilização de 2 h, o que daria uma diferença significativa nos últimos momentos entre o controle e grupos Bupiva + Acup. No modelo de rato de dor visceral induzida por óleo de mostarda, agulhas de acupuntura foram inseridas em B62-64 e giradas manualmente, e a sensibilidade visceral foi avaliada no registro das respostas eletromiográficas (EMG) a distensões colorretais (DIC) graduadas de 20, 40, 60. e 80 mmHg em ratos conscientes. Um aumento significativo nas descargas EMG em resposta a CRDs foi observado em ratos tratados com óleo de mostarda (Controle) em comparação com ratos normais (Normal). As respostas EMG elevadas foram atenuadas nos ratos que receberam tratamento com acupuntura [one-way ANOVA, 20 mmHg; F(4, 30) = 4,755; p = 0,025, 40 mmHg; (4, 30) = 7,273; p = 0,003, 60 mmHg; (4, 30) = 8,047; p <0,001, 80 mmHg; (4, 30) = 8,845; p <0,001 vs. Controle], que foi revertida pelo pré-tratamento de bupivacaína [one-way ANOVA, 20 mmHg; (4, 30) = 4,755; p = 0,514, 40 mmHg; (4, 30) = 7,273; p <0,001, 60 mmHg; (4, 30) = 8,047; p= 0,009, 80 mmHg; F(4, 30) = 8,845; p = 0,002 vs. Acup]. No entanto, os efeitos inibitórios da acupuntura na dor visceral não foram alterados pelo tratamento com colagenase antes do tratamento com acupuntura (Figuras 3G–I). Essa observação indica o papel mediador dos nervos aferentes nos efeitos da acupuntura.

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Efeito da pré-injeção de colagenase ou bupivacaína em acupontos em vários modelos animais. (A – C) Efeito do pré-tratamento da colagenase tipo 1 ou da bupivacaína no acuponto HT7 na atividade locomotora induzida pela cocaína em ratos. A inibição da locomoção induzida pela cocaína pela acupuntura no HT7 (Acup) foi prevenida pelo pré-tratamento da bupivacaína (BUPIVA) no acuponto HT7 (A) , mas não pela colagenase do tipo I (COLG; B, C ). * p <0,05 vs. normal; p <0,05 vs. Controle; p <0,05 vs. BUPIVA + Acup; n = 5 por grupo. Traçados representativos (B) . (D – F)Efeito do pré-tratamento da colagenase ou bupivacaína tipo I no acuponto PC6 na hipertensão induzida por imobilização em ratos. A bupivacaína, mas não a colagenase, inibiu os efeitos da acupuntura do PC6 (D) na pressão arterial sistólica elevada em ratos (E, F). Sinais de pulso representativos medidos da cauda (E) * p <0,05 vs. Controle (imobilização apenas sem acupuntura); p <0,05 vs. BUPIVA + Acup; n = 5 por grupo. (G – I)Efeito do pré-tratamento da colagenase tipo I ou bupivacaína em acupontos na dor visceral induzida por óleo de mostarda em ratos. Eletromiograma (EMG) em cada grupo foi registrado durante a distensão colorretal de 20, 40, 60 e 80 mmHg por aproximadamente 5 s. Ratos normais, normais; Controle, mostarda apenas sem acupuntura; Acup, acupuntura em ratos tratados com mostarda; COLG + Acup, pré-tratamento da colagenase antes da acupuntura em ratos tratados com mostarda; BUPIVA + Acup, pré-tratamento da bupivacaína antes da acupuntura em ratos tratados com mostarda. n = 7 por grupo. Acupontos usados. (G) Representante de sinais EMG registrados durante distensão colorretal de 80 mmHg (H). A bupivacaína, mas não a colagenase, inibiu os efeitos da acupuntura na resposta motora visceral induzida pela distensão colorretal em ratos (I) . * p <0,05 vs. normal; p <0,05 vs. Controle; p <0,05 vs. BUPIVA + Acup; n = 7 por grupo. Acup, acupuntura; COLG, colagenase; BUPIVA, bupivacaína.

Tecido conectivo interrompido pela colagenase tipo I em acupontos sem alterações morfológicas no nervo aferente

Para avaliar a alteração funcional do tecido conjuntivo nos acupontos injetados com colagenase ou bupivacaína, construímos um sensor de torque ( Figuras 4A, B ) e medimos a força rotacional (torque) atuando na agulha no tecido. A agulha de acupuntura inserida no acuponto C7 sobre o punho foi conectada ao porta-agulha do dispositivo de torque e torcida manualmente. A torção bidirecional da agulha gerou ondas em dentes de serra, com amplitudes na faixa de -15 a 15 mN.mm nos ratos normais não tratados (Normal, Figura 4C ). Enquanto a força de rotação da agulha não foi alterada nos acupontos injetados com bupivacaína comparados aos de ratos normais (BUPIVA; Figuras 4E, F ), uma queda significativa na força rotacional foi encontrada nos acupontos tratados com colagenase (COLG; *p <0,05 vs. Normal; Figuras 4D, F ). Essa observação indica que a colagenase do tipo I eliminou a tração das fibras de colágeno criadas durante a manipulação da agulha.

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Figura 4 . Efeito da pré-injeção de colagenase ou bupivacaína em acupontos na força de rotação (torque). (A, B) Um sensor de torque de construção simples (A) e seu circuito elétrico (B) . (C – F) Força de rotação registrada durante a torção da agulha nos acupontos tratados com colagenase ou bupivacaína. Uma queda significativa da força de rotação foi encontrada nos acupontos tratados com colagenase (D) emcomparação aos ratos normais (C) ou tratados com bupivacaína (E) . * p <0,05 vs. normal; n = 5 por grupo. COLG, colagenase; BUPIVA, bupivacaína.

Para identificar se a colagenase causa dano morfológico do tecido conjuntivo ou do nervo periférico nos acupontos, a pele sobre acupontos foi avaliada através de métodos histológicos ou imuno-histoquímicos. Na coloração H & E, a pele tratada com colagenase apresentou coloração fraca, com feixes finos de colágeno esparso e uma densidade significativamente menor de fibras colágenas comparada com ratos normais não tratados (Figuras 5A, B ; * p <0,05). Por outro lado, em uma análise imuno-histoquímica quantitativa para PGP 9.5, um marcador de fibras nervosas (Beiswenger et al., 2008), as alterações morfológicas do nervo periférico não foram observadas na pele tratada com colagenase em comparação ao grupo normal ( Figuras 5C, D). Além disso, o exame histológico revelou que a colagenase tipo I tinha sido injetada nos acupontos difundidos na pele, incluindo a epiderme, a derme e os tecidos subcutâneos (Figura 5E). Isto sugere que a injeção de colagenase tipo I em acupontos interrompeu a conectividade das fibras de colágeno, mas não induziu dano morfológico dos nervos periféricos na pele.

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Figura 5 . Exame histológico ou imuno-histoquímico de acupontos injetados com colagenase. (A, B) coloração H & E de pontos de acupuntura tratados com colagenase ou salina. Quantificação da área corada de rosa em pele normal ou tratada com colagenase (B) . * p<0,05 vs. normal;n = 5 por grupo. (C, D) Imuno-histoquímica para PGP9.5, um marcador neuronal, em acupontos normais ou tratados com colagenase (C) . Intensidade média de fluorescência em pele normal ou tratada com colagenase (D) . n = 5 por grupo. COLG, colagenase. Barra = 50 μm. (E)Difusão de solução mista de corante azul de toluidina e colagenase tipo I injetada em acupontos. Linha amarela = área azul corada com azul de toluidina. Barra = 1 mm.

DISCUSSÃO

Usando nosso dispositivo robótico que simulou a torção da agulha por um acupunturista humano, demonstramos que a torção da acupuntura efetivamente suprimiu a atividade locomotora induzida pela cocaína, a hipertensão induzida pela imobilização e a dor visceral induzida pelo óleo de mostarda, que foi completamente evitada pelo bloqueio dos nervos aferentes com bupivacaína, mas não degradando tecido conjuntivo com colagenase tipo I. Além disso, a colagenase destruiu o colágeno na pele sem danificar o nervo periférico. Nossos achados sugerem mediação crítica do nervo na produção de efeitos de acupuntura. Além disso, a modulação do tecido conjuntivo não parece ser suficientemente confiável para servir como principal explicação para os efeitos da acupuntura, pelo menos nos modelos animais testados.

Electroacupuncture

Imagem ilustrativa, não se refere ao presente estudo

As agulhas de acupuntura são manipuladas manualmente para obter efeitos terapêuticos após a inserção da agulha nos acupontos (Pomeranz e Berman, 2003). Várias técnicas de manipulação, como torção (também conhecida como rotação de torção bidirecional), vibração e elevação e empuxo, têm sido usadas em clínicas. Entre eles, a torção manual tem sido popular porque é uma técnica simples e eficaz para provocar a sensação de agulhamento chamada deqi , que os acupunturistas acreditam ser essencial para a obtenção de estimulação eficaz da acupuntura (Pomeranz e Berman, 2003 ; Stux e Pomeranz, 2012). Kim GH et al., 2010 relataram que a torção manual é mais eficaz do que a técnica de elevação na produção de efeitos analgésicos na dor induzida pela formalina em ratos. Nós e outros temos mostrado que a torção manual de agulhas aplicada a pontos de acupuntura C7 suprime comportamentos aditivos induzidos por drogas abusadas, incluindo cocaína, metanfetamina e etanol (Yang et al., 2010 ; Jin et al., 2018 ; Kim et al., 2018). Além disso, a acupuntura em C7 atenua a liberação de dopamina induzida por drogas e a atividade neuronal metabólica no nucleus accumbens (Yoon et al., 2004 ; Jin et al., 2018) através dos receptores de glutamato metabotrópicos do grupo II (Kim et al., 2018) e modulação da atividade do neurotransmissor GABA na área tegmentar ventral (Yang et al., 2010). Embora esses estudos forneçam evidências de que a manipulação de agulhas de acupuntura produz efeitos terapêuticos, a estimulação manual por acupuntura pode alterar seu efeito, afetando muito, incluindo durações de rotação e ângulos. Infelizmente, poucos estudos quantificaram a técnica de torção realizada por praticantes. Portanto, o presente estudo analisou em vídeo o movimento de torção de agulha realizado por acupunturistas e descobriu que a duração da rotação da agulha variava de 0,75 a 1,21 s (valor médio de 0,975 ± 0,073 s) e ângulos de rotação variavam de 325° a 350° (valor médio de 340° ± 4,27°). No entanto, variações consideráveis ​​em durações e ângulos foram observadas dentro de cada acupunturista ou entre os acupunturistas (dados não mostrados). As variações podem levar a baixa reprodutibilidade e altas variações individuais entre os praticantes (Napadow et al., 2005 ; Kim et al., 2013 ). Como nosso twister robótico tem uma vantagem no controle da duração e do ângulo de rotação, isso ajudaria a resolver os problemas de controle da manipulação manual de agulhas.

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Imagem ilustrativa, não se refere ao estudo

Pesquisadores sugeriram que a torção da agulha em diferentes parâmetros de estimulação [incluindo durações (ou frequência, Hz) e ângulos, etc.] poderia produzir diferentes respostas fisiológicas e efeitos terapêuticos ( Kim GH et al., 2010 ; Chang et al., 2017 ). Hong et al. (2015) mostraram que as respostas dos neurônios do corno dorsal da coluna após a distensão gástrica são aumentadas pela acupuntura manual a 0,5 e 1 Hz, enquanto os neurônios do corno dorsal são inibidos pela acupuntura manual a 2 e 3 Hz. No presente estudo, os efeitos da acupuntura não foram dependentes da duração ou ângulo de rotação quando várias durações ou ângulos de torção da agulha foram testados em três diferentes modelos animais. Da mesma forma, um estudo anterior tentou determinar os efeitos analgésicos da acupuntura em 4 diferentes condições de estimulação (ângulo e frequência de rotação: 90° + 1 Hz, 90° + 1/4 Hz, 360° + 1 Hz e 360​​° + 1/4 Hz) utilizando um dispositivo rotativo controlado por computador em ratos. Este estudo mostrou que apenas a condição de 90° + 1/4 Hz gera um efeito estatisticamente significativo em relação à acupuntura simples (Kim et al., 2006 ). Esses achados indicam que não parece haver uma correlação entre a duração da rotação ou os ângulos e o grau de alteração da resposta na manipulação da agulha torcida. Em vez disso, os efeitos da acupuntura podem exigir parâmetros de estimulação específicos, de acordo com o que foi encontrado em modelos animais. Além disso, de acordo com um estudo anterior (Kim et al., 2006), nossos dados mostraram que a simples colocação da agulha não gerou efeitos de acupuntura na locomoção induzida por cocaína em ratos. Ele apóia as observações de que manipulações de agulha, como rotação e estimulação elétrica, são necessárias para alcançar os efeitos desejados pela ativação de fibras nervosas sensoriais e células, em contraste com a colocação de agulha (sham acupuntura) (Kim et al., 2006 ;Guo et al., 2018).

No presente estudo, a injeção de um anestésico local de longa duração bupivacaína em acupontos bloqueou efetivamente os efeitos da acupuntura nos modelos de locomoção induzida por cocaína, hipertensão e dor visceral induzida por óleo de mostarda, sugerindo que os sinais de acupuntura são transmitidos através de fibras nervosas aferentes . Esses resultados concordam com relatos de que a aplicação de anestésico local, lidocaína a 1%, a pontos de acupuntura antes do tratamento com acupuntura inibe a ação antiemética da acupuntura no PC6 em pacientes submetidos à cirurgia ginecológica (Dundee e Ghaly, 1991) e que a injeção de anestésico local procaína em E36 bloqueia a analgesia por acupuntura em modelos animais (Ulett et al., 1998). Além disso, o papel das fibras nervosas aferentes nos impulsos iniciados por acupuntura foi apoiado por várias observações (dadas abaixo). É relatado que a analgesia por acupuntura é inibida após o seccionamento de nervos inervadores dos acupontos (Noguchi e Hayashi, 1996 ; Kim HY et al., 2010) e é reproduzida por estimulação direta dos nervos expostos (Li et al., 1998 ; Kim HY et al. 2010). Manual e eletroacupuntura nos acupontos PC6-7 ativam as fibras Aδ e C para evocar um efeito cardiovascular (Zhou et al., 2005), que é eliminado pela capsaicina neonatal para bloquear aferentes de fibra C (Tjen-a-Looi et al., 2005). A estimulação do acuponto ativa os receptores opióides na medula ventrolateral rostral, um sítio central que regula a pressão sanguínea (Sved et al., 2003 ), e suprime a hipertensão induzida por estimulação (Tjen-a-Looi et al., 2003 ; Kim et al., 2017 ). Como mostrado em nosso estudo anterior, a estimulação mecânica dos pontos de acupuntura C7 ativa os aferentes sensoriais periféricos, como os corpúsculos de Pacinian e Meissner, que são transportados através de grandes fibras A do nervo ulnar e da via somatossensorial da coluna dorsal medular. Esses sinais aumentam a atividade neuronal do ácido γ-aminobutírico (GABA) na área tegmentar ventral (VTA) e suprimem a liberação de dopamina extracelular no núcleo accumbens (Jin et al., 2018), resultando na atenuação da atividade locomotora induzida pela cocaína ou dos comportamentos de busca por cocaína (Kim et al., 2013 ; Chang et al., 2017 ; Jin et al., 2018 ). De fato, as evidências acima indicam que a acupuntura estimula as fibras nervosas aferentes que, por sua vez, enviam mensagens para o cérebro.

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Imagem ilustrativa, não se refere ao estudo

Uma teoria emergente propõe um papel mediador do tecido conjuntivo nos efeitos da acupuntura, em que a acupuntura transmite sinais através das camadas do tecido conectivo em torno dos grupos musculares, órgãos e vasos sanguíneos. Esta teoria postula que a manipulação de agulhas de acupuntura cria um enrolamento de tecido conjuntivo ao redor da agulha, conhecido como “agarre agulha”, e por sua vez ativa vias de sinal por deformação do tecido conjuntivo, resultando em efeitos terapêuticos (Langevin e Yandow, 2002 ; Langevin et al. , 2007). Estudos anteriores também descobriram que a torção da agulha produz uma resposta ativa do citoesqueleto de uma maneira que depende do número de rotações e do ângulo da agulha (Langevin et al., 2007). Este procedimento também induz a degranulação dos mastócitos nos tecidos dos pontos de acupuntura por meio de uma interação com as fibras de colágeno (Zhang et al., 2008 ; Wu et al., 2015). Embora muitos estudos, liderados principalmente pelo grupo de pesquisa Langevin, tenham proposto ações biomecânicas do tecido conjuntivo durante a manipulação da acupuntura (Langevin e Yandow, 2002 ; Langevin et al., 2007 ; Langevin, 2014), até à data, não foi completamente determinado se o tecido conjuntivo está associado aos efeitos terapêuticos da acupuntura. No presente estudo, um valor pico-a-pico de torque de cerca de 30 mN.mm foi gerado pela torção de uma agulha inserida no C7, que foi reduzida para cerca de 3 mN.mm após a injeção de colagenase do tipo I, semelhante aos relatados em um estudo anterior (Yu et al., 2009). Assim, uma injeção de colagenase do tipo I em pontos de acupuntura interrompeu o fenômeno de “apreensão da agulha”, causando a quebra do tecido conjuntivo. A colagenase tipo I não afetou a expressão do marcador neuronal PGP9.5 na pele, indicando que o nervo aferente na pele tratada com colagenase estava intacto. Importante, a ruptura do tecido conjuntivo pela colagenase tipo I não conseguiu bloquear os efeitos de acupuntura gerados pela torção da agulha nos modelos de ratos testados. Por outro lado, a bupivacaína, anestésico local de ação prolongada (Rosenberg e Heinonen, 1983), injetados em pontos de acupuntura, efetivamente bloqueavam os efeitos da acupuntura sem afetar o contato das agulhas no tecido conjuntivo. Em conjunto, nossos dados sugerem que a acupuntura pode não recrutar tecido conjuntivo para produzir efeitos terapêuticos. Em contraste com nossos resultados, Yu et al. relataram que a destruição das fibras de colágeno com colagenase tipo I nos pontos de acupuntura da E36 inibiu os efeitos da acupuntura na dor inflamatória em ratos (Yu et al., 2009). A razão para essa discrepância não é completamente entendida no momento, mas uma possível explicação é que os pontos de acupuntura escolhidos neste experimento estavam localizados nos membros distais (C7, PC6 e B62-64), que contêm relativamente menos tecido subcutâneo, enquanto o experimentos no papel por Yu et al. usado E36, que é um acuponto mais proximal enriquecido em tecido conjuntivo frouxo. Considerando que a interação da agulha com as fibras colágenas ocorre principalmente dentro do tecido subcutâneo frouxo, mas não dentro da derme ( Langevin e Yandow, 2002), a interação entre a agulha e o tecido conjuntivo frouxo nos acupontos proximais, como o E36, pode ser maior do que os acupontos distais usados ​​no presente estudo. No entanto, nossa capacidade de tirar conclusões sobre a importância das fibras nervosas aferentes nas respostas mediadas por acupuntura, em vez de tecido conjuntivo, foi prejudicada pela maior limitação do presente estudo, em que 5 pontos de aproximadamente 360 ​​pontos de acupuntura foram investigados usando três modelos animais. . Estudos mais extensos usando vários modelos animais e acupontos serão necessários.

Em conclusão, a torção da acupuntura produziu efeitos terapêuticos em modelos de locomoção induzida por cocaína, hipertensão e visceral induzida por óleo de mostarda, e esses efeitos foram abolidos por um bloqueio do nervo aferente na proximidade de pontos de acupuntura, mas não pelo rompimento de fibras colágenas. Por conseguinte, parece razoável propor que os efeitos da acupuntura requerem mediação pelo tecido nervoso, mas não pelo tecido conjuntivo. Este estudo ajuda a entender os mecanismos envolvidos no início dos sinais de acupuntura.


Doi: | https://doi.org/10.3389/fnins.2019.00110

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